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本文目录一览：
- 1、目前用于测序的技术主要有哪些?
- 2、二代测序技术原理及流程
- 3、【现学现卖】实验-DNA测序(第一代至第三代)
- 4、新一代测序技术
- 5、第二代DNA测序技术的操作流程
- 6、目前基因组测序最新的方法有哪些?
目前用于测序的技术主要有哪些?
1、（三）、SnaPshot测序技术 SNaPshot技术是美国应用生物公司（ABI）开发，是荧光标记单碱基延伸的分型技术，也称小测序，主要针对中等通量的SNP突变分型检测。通常用于10~30个SNP突变位点分析。
2、用于测序的技术主要有Sanger（1977）发明的双脱氧核糖核酸链末端终止法，Sanger测序法得到了广泛的应用。
3、DNA测序技术，即测定DNA序列的技术。在分子生物学研究中，DNA的序列分析是进一步研究和改造目的基因的基础。目前用于测序的技术主要有Sanger等（1977）发明的双脱氧链末端终止法和 Maxam和 Gilbert（1977）发明的化学降解法。
4、二代测序就是一种技术，不过测序原理分几种，一种是illumina的边合成边测序原理，目前使用最多，还有就是life的h离子转换ph的测序方法。
5、本文主要介绍Illumina测序技术、Pacific BioSciences SMRT RS测序技术、Oxford纳米孔测序技术及华大平台的DNBSEQ TM 测序技术。 该技术是目前应用最广泛的新一代基因组测序平台，它使用边合成边测序技术实现大规模平行测序。
6、目前二代测序主要技术方案，是靶向区域测序（panel），从靶向区域获取的技术来区分主要分为液相捕获技术（采用RNA探针或者DNA探针），以及PCR目标区域捕获技术。
二代测序技术原理及流程
1、二代测序原理也就是文库构建，PCR产生的片段或基因组打断的片段两端需要添加接头修饰才能进行测序。末端修饰。打断的片段是随断裂，其末端可能是不平的。因此，建库第一步是补齐不平的末端。添加接头。
2、首先准备基因组，然后将DNA随机片段化成几百碱基或更短的小片段，并在两头加上特定的接头。
3、二代测序原理：分别把 DNA 分子链以一种叫Sanger 方法的方法进行分解，然后再测序，这样就能够得到一条完整的DNA链，从而确定 DNA序列.二代测序技术的优势在于快速、准确、效率高，可以同时测定大量样品。
4、而PCR捕获不需要DNA片段化，直接先PCR把目标区域富集然后再加接头。而不论是哪种捕获技术，靶向区域测序一般都有以下环节：DNA提取，文库制备，目标区域富集，上机测序四大环节。
【现学现卖】实验-DNA测序(第一代至第三代)
1、一代测序 首先讲一下测序的基础方法，Sanger测序 (Sanger et al.，1977) 1977年Frederick Sanger和同事发展出双脱氧测序法(dideoxy sequencing method)或称链终止法，并对噬菌体phiX-174测序以来，测序原理并未有太多变化。
2、第一代测序：指双脱氧末端终止法，扩增后通过毛细管电泳读取序列，每次获取数据量少。
3、第一代测序技术 Sanger法是基于DNA合成反应的测序技术，又称为SBS法、末端终止法。1975年由Sanger提出，并于1977发表第一个完整的生物体基因组序列。
4、可以检测DNA的修饰情况，试剂比较简单，对实验条件要求不高，所以化学降解法一度被广泛使用。Sanger测序虽然需要引物，DNA聚合酶等，但是现在的高通量测序大都是基于Sanger测序的原理进行的，例如罗氏454，ABI的SOLID等技术。
5、所谓的NGS即Next-generation sequencing，翻译为“下一代测序技术”，或者是“第二代测序技术”，也叫高通量测序技术。
6、现在的第三代测序技术中，主要以PacBio公司的SMRT和Oxford的Nanopore技术为主。与前面的两代技术比较，第三代最主要的特点在于单分子测序，就是测序的过程无需进行PCR扩增了。
新一代测序技术
新一代测序技术(next-generation sequencing， NGS)的起点是2005年以来Roche 45Illumina GA/HiSeq、Life SOLiD/Ion Torrent、PacBio RS技术的发明，新技术使测序通量快速增加，测序成本极大降低。
sanger测序是目前所有基因测序的国际金标准，是包括荧光定量PCRTaqman探针法、普通PCR法、芯片法、二代测序法、质谱法等方法的金标准。
新一代测序(NGS)主要包括全基因组重测序(whole-genomesequencing，WGS)、全外显子组测序(whole-exomesequencing，WES)和目标区域测序(Targetedregionssequencing，TRS)，它们同属于新一代测序技术。
合成法测序原理：将基因组DNA的随机片段附着到光学透明的玻璃表面（即Flow cell），这些DNA片段经过延伸和桥式扩增后，在Flow cell上形成了数以亿计Cluster，每个Cluster是具有数千份相同模板的单分子簇。
第二代DNA测序技术的操作流程
②添加接头：经过末端修饰后的PCR片段末端具有突出的A尾，而接头具有突出的T尾，可以使用连接酶将接头添加到DNA片段两端。
将适量血浆常温融化，提取血浆中游离的DNA片段进行纯化，现在普遍使用的是操作简单、耗时较短的磁珠法。
而不论是哪种捕获技术，靶向区域测序一般都有以下环节：DNA提取，文库制备，目标区域富集，上机测序四大环节。DNA提取：常规DNA提取一般都能满足二代测序的样本要求。
(1) 将混合物离心，将扩增产物转移到5ml ep管中。(2) 加入25μl醋酸钠/乙醇混合液，充分振荡，置冰上10min以沉淀dna。12 000r/min于4℃离心30 min，小心弃上清。(3) 加70%(v/v)的乙醇50μl洗涤沉淀2次。
目前基因组测序最新的方法有哪些?
目前用于测序的技术主要有Sanger等（1977）发明的双脱氧链末端终止法与Gilbert（1977）发明的化学降解法。
该方法的第一步是 建立测序文库(sequencing library preparation)(图1)。基因组打碎成小片段，双端补齐，3’加A尾，添加Illumina专用接头(一端有oligo T)，该接头含有一个酶切位点，且为环状非互补链，故形成一个“球形”接头。
问题一：全基因组测序的技术路线 提取基因组DNA，然后随机打断，电泳回收所需长度的DNA片段(0.2~5Kb)，加上接头， 进行基因簇cluster制备或电子扩增E-PCR，最后利用Paired-End(Solexa)或者Mate-Pair(SOLiD)的方法对插入片段进行测序。
第1 代测序技术 荧光标记的Sanger 法—— 在分子生物学研究中，DNA的序列分析是进一步研究和改造目的基因的基础。用于测序的技术主要有Sanger（1977）发明的双脱氧核糖核酸链末端终止法，Sanger测序法得到了广泛的应用。
目前，连锁分析采用的单核苷酸多肽性和短串联重复序列还在使用，但经典的间接测序方法，如单链构象多肽性、变性梯度凝胶电泳和异源双链分析在美国已被淘汰，而在发展中国家作为研究手段还在有限使用。
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